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干燥方法和提取温度对板蓝根、大青叶有效成分的影响

归档日期:07-12       文本归类:白前      文章编辑:爱尚语录

  干燥方法和提取温度对板蓝根、大青叶有效成分的影响_药学_医药卫生_专业资料。中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs第39卷第1期2008年1月 ?111? 着萌发抑制物质,能明显抑制双子叶白菜、单子叶小 麦和黄檗自身种子的萌发

  中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs第39卷第1期2008年1月 ?111? 着萌发抑制物质,能明显抑制双子叶白菜、单子叶小 麦和黄檗自身种子的萌发及生长。不同溶剂类型对 抑制物质的溶解度不同,依次为>甲醇>蒸馏 水,故此推断此抑制物质可能为非极性化合物。黄檗 果肉和种子的浸提液对白菜种子萌发和幼苗生长的 抑制作用均高于对小麦的抑制作用,可能与种子大 小或自身对抑制剂的敏感程度有关。黄檗果肉及种 子中含有大量挥发性物质,但经过实验证明其挥发 物对白菜、小麦种子萌发均无抑制作用。 黄檗果实及果序都较大,除鸟类采集外,果实均 散落在树冠周围,种子需在果皮腐烂后才能与地表 接触,而果实腐烂速度很慢,因此种子萌发受果皮及 种子中抑制物质的影响可能是黄檗自我更新障碍的 主要原因之一。 根据研究结果和资料记载,黄檗种子具有休眠 特性,种子发芽率低的原因主要为3方面:一是其种 子座果率低,成熟度受环境因素影响较大[63;二是种 子和果肉中存在着活性较强的内源抑制物质,影响 了种子的发芽进程;三是黄檗种子具有胚生理后熟 的特点,种子需要经过低温层积处理,才能有效提高 发芽率口]。 参考文献: E1J傅立国.中国红皮书——稀有濒危植物[M].北京:科学出版 社,1991. [2]鲁长虎,常家传,许青.黄檗的更新特点及食果实鸟类对其 种子的传播[J].生态学杂志,2004,23(1):24—29。 夏天睿.野生黄檗自我更新障碍的种内因素及化学成分多样 性研究[A].中国协和医科大学硕士学位论文[D].北京:中 国学术期刊电子杂志社,2006. E4]张秋菊,秦佳梅,徐克章.不同溶剂提取对返魂草种子中抑制 物质活性的影响EJ3.植物生理学通讯,2006,37(1):29—30. E5]赵敏.防风种子中内源抑制物质活性的研究EJ].中草药, 2004,35(4):441—444. [3] [6]刘利敏.中药材黄柏及其开发利用[J].陕西师范大学学报 (自然科学版),2004,32(9):174—179. [73于俊林,张昭,张本刚,等.长自山黄檗基本情况调查及保 护口].中草药,2006,37(3):461—463. 干燥方法和提取温度对板蓝根、大青叶有效成分的影响 董娟娥L2,龚明贵2,梁宗锁1’2,王淑英3 (1.西北农林科技大学,陕西杨凌 712100;2.中国科学院水利部水土保持研究所,陕西杨凌 753406) 712100; 3.宁夏平罗县黄渠桥镇林业站,宁夏平罗 摘要:目的研究干燥方法和提取温度对板蓝根、大青叶有效成分量的影响,为确定板蓝根、大青叶规范化生产 的干燥技术参数提供理论依据。方法采用晒干、阴干和不同温度的烘干方法干燥板蓝根、大青叶,采用不同温度 水浴提取有效成分,HPLC法测定靛蓝、靛玉红的量。结果60℃烘干板蓝根、大青叶有效成分损失最少,以60℃ 烘干为标准,高温(90℃以上)干燥使板蓝根有效成分损失40%~60%、大青叶有效成分损失30%一60%,阴干也降 低了板蓝根、大青叶中的有效成分的量;采用索氏提取法、以氯仿为提取溶剂、水浴温度为80~85℃时对靛蓝、靛玉 红的提取率最高,其次是90、75℃,95℃的提取率最低。结论50~80℃烘干和晒干是板蓝根、大青叶适宜的干燥 方法,阴干和高温烘干的方法不可取。采用索氏提取方法、以氯仿为提取溶剂时,80~85℃水浴温度较为适宜。 关键词:菘蓝;板蓝根;大青叶;干燥;靛蓝;靛玉红 中图分类号:R282.6 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2008)01一011l—04 Effect of drying method and extracting temperature on contents of bioactive constituents in Radix Isatidis and Fotingirt Isatidis DONG Juan—e1~,GONG (1.College of Forestry,Northwest Ming—gui2,LIANG Zong—SU01~,WANG Shu—yin93 A&F University,Yangling 712100,China;2.Northwest Institute of Soil and Resources,Chinese Academy Science,Yangling 712100,China; Town,Pingluo 753406,China) on Water Conservation,Ministry of Water 3.Foresty Station of Huangqu Bridge Abstract:Objective the bioactive To study the effect of different drying methods and extracting temperatures Radix Isatidis and Folium the sun,and baked constituents in Isatidis.Methods out Radix Isatidis and Folibtm 厶atidis were dried in the shade,in with different temperatures:the bioactive 收稿日期:2007—05—03 基金项目:陕西省“十五”科技攻关项目(2001KG01一G15-03) 作者简介:董娟娥(1968--),女,副教授,主要从事天然产物提取和中药现代化理论与技术教学、研究工作。 E—mail:die009@126.com 万方数据 ?112? 中草菊ChineseTraditional Radix Isatidis and Folium andHerbal Drugs第39卷第1期2008年1月 method under Bioactive constituents in Isatidis were extracted by Soxhlet extracting different temperatures;the contents of indigo and indirubin were determined by HPLC.Results constituents of Radix Isatidis and Folium Isatidis lost less under the drying temperature of 60℃.The contents of the bioactive constituents reduced at 40%~60%in Radix Isatidis and 30V00~60%in Folium Isatidis at high drying temperature(over 90℃)and also reduced by dried in the shade compared with that contents drying temperature of 60℃.The contents of the bioactive constituents were also reduced by dried in the shade:the of indigo and indirubin were the highest under the extracting temperature of 80—85℃ 0— by using Soxhlet extracting method with chloroform solvent,the 10west,95℃.Conclusion methods for drying Radix Isatidis and Folium Isatidis 80℃.The temperature of water bath has are to The suitable be dried in the on sun and baked under 5 rate significant impact the extraction of the bioactive constituents while using Soxhlet extracting methods,80一85℃are suitable. Key words:Isatis indigotica Fort.;Radix Isatidis;Folium Isatidis;drying;indigo;indirubin 影响中药材有效成分量的因素很多,如产地、种 植、采收、初加工、贮运等[1“],其中产地初加工是中 药材生产的重要环节,也是中药饮片生产的“第一车 间”,直接影响到饮片的质量[6]。长期以来,中药材的 种植、初加工、炮制等环节一直停留在传统的操作模 式上,致使中药材的质量达不到现代医学及人们生 活水平不断提高的需要,成为制约中药甚至中医发 展的瓶颈,也是我国中药走向世界的主要障碍之一。 为此,国家食品药品监督管理局于2002年颁布并实 施了《中药材生产质量管理规范》(GAP),以推动中 药质量的全面提升,其中包括了产地、种植、采收、加 工、包装、贮运等的全面规范化,并规定中药材的采 收、加工、干燥过程要有明确的技术参数。在中药材 加工、干燥过程中,处理温度是影响药材内外质量的 决定因素。 板蓝根和大青叶分别为十字花科(Cruciferae) 植物菘蓝Isatis indigotica 植基地(GAP基地)。基地土壤为砂壤土,pH值为 6.79,弱酸性。 1.2仪器与试剂:高效液相色谱仪(LC一10ATvp 型,日本岛津);精密电子天平(METTLER TOLED0 AG204型,瑞士)。 试剂:氯仿(AR级,天津化学试剂厂),色谱甲 醇(美国Fisher公司),水为双蒸水。靛蓝、靛玉红对 照品(中国药品生物制品检定所)。 2 方法 2.1靛蓝、靛玉红指标成分的HPLC检测‘9] 2.1.1色谱条件:流动相为甲醇一水(75:25);色谱 柱:C18 ODS反相柱(SHMADZU)150 mm×4.6 mm;检测波长:280 nm;体积流量:1 mL/min;柱温 25℃。在此色谱条件下,理论塔板数以靛玉红计不 低于4 000,色谱图见图1。 1 Fortune的根和叶,具有 清热解毒、凉血、消斑的功效,主治温病发热、发斑、 发疹、风热感冒、咽喉肿痛、流行性脑脊髓膜炎、乙型 脑炎、肝炎、腮腺炎、丹毒、痛肿等症[7],是治疗感冒 常用的大宗药材。具调查,目前市售的板蓝根和大青 叶均没有统一的干燥方法,仍然存在着质量标准不 够明确,采收、初加工缺乏相应的质量管理规范等问 题,致使板蓝根及其制剂在国际市场上得不到认 可[8]。为了解决这一问题,以靛蓝、靛玉红为指标性 成分,研究温度对这2种成分量的影响,为确定板蓝 根、大青叶干燥的技术参数,实现板蓝根、大青叶的 规范化生产和提高中药材质量提供理论依据。 1材料、仪器与试剂 1.1实验材料:大青叶于2004年4月中旬、板蓝根 于2004年10月中旬采自陕西汉阴板蓝根规范化种 矿——丁——了——i1矿——r——r——F1 t/min 图1靛蓝(1)、靛玉红(2)对照品(a)和样品(b)的色谱图 Fig.1 Chromatogram of indigo(1),indirubin(2) reference substance(a),and sample(b) 2.1.2标准曲线℃烘箱中干燥至恒 重的靛玉红对照品4.4 mg、靛蓝对照品1.9 mg,置于 25 mL棕色量瓶中,用氯仿(分析纯)稀释至刻度作为 对照品溶液。分别精密吸取靛蓝、靛玉红对照品溶液1、 2、4、6、8、10、12 tLL注入高效液相色谱仪,以色谱峰面 积(x)和对应的质量浓度(y,mg/mL)作标准曲线, 计算回归方程。靛蓝的回归方程为:Y一1.864 35× 万方数据 中草药 10_8 X一0.003 Chinese Traditional and Herbal Drugs第39卷第1期2008年1月 ?113? 190 47(r一0.999 5),线不同处理板蓝根、大青叶有效成分量的比较 Table 1 0.015 2~0.184 2 mg/mL;靛玉红的回归方程为: (,.一 Comparison of contents of bioactive components Y一1.237 59×10川X+0.000 102 616 0.999 in Radix Isatidis and Folium Isatidis treated by different 8),线 mg/mL。 处理方式 50℃烘干 60℃烘干 80℃烘干 methods 大青叶/(mg?kg一1) 靛蓝 a 2.1.3测定法:精密称取不同处理的待测板蓝根样 品2 g、大青叶样品0.5 g,分别置150 mL平底烧瓶, 板蓝根/(mg?kg 1) 靛蓝 6.138 9 6.168 9 5.705 2 1 a 靛玉红 12.458 2 12.548 8 靛玉红 a 314.478 8 330.633 3 325.585 6 275.393 342.280 362.325 352.803 198.256 1 8 3 b a 加入100 mL氯仿浸泡15 h,在80℃水浴中索氏回流 提取i0 h,减压浓缩提取液近干,用氯仿转移并定容 至50 mL容量瓶中,0.45弘m微孔滤膜滤过后,用微 量进样器吸取5 pL注入高效液相色谱仪。以色谱峰 面积和标准曲线计算样品中靛蓝、靛玉红的量。 2.2干燥方法对板蓝根、大青叶中靛蓝、靛玉红量 的影响:将新鲜采集的板蓝根、大青叶样品分别采用 烘箱烘干(设定温度:50、60、80、100、120 oc)、阴干、 晒干等方法进行干燥处理。记录不同处理下板蓝根、 大青叶外观质量的变化。粉碎,过40目筛。精密称取 各处理的板蓝根样品粉末2 g、大青叶样品粉末0.5 g,置索氏提取器中,加氯仿100 mL浸泡15 h,水浴 中索氏回流提取10 h,浓缩提取液,置50 mL量瓶 中,用氯仿定容至刻度,0.45肛m微孔滤膜滤过,高 效液相色谱仪测定不同处理样品中靛蓝、靛玉红 的量。 2.3提取温度对板蓝根、大青叶中靛蓝、靛玉红量 的影响:精确称取自然干燥的板蓝根样品粉末2 g、 a a a a 1l-455 4 ab 6.817 3 5.295 2 i0.422 1 12.314 9 c a a 100℃烘干3.882 120℃烘干1.971 阴干4.895 晒干 F检验 C 9 b C 6 d e 7 d 1 d b a 160.495 4 299.964 321.436 2 7 132.852 9 281.153 341.266 2 b a a c 5.986 0 a 7 b F=45.69¨F=44.364¨F一337.297¨F=13 782.17¨ 表中字母a~e表不在1%显著水平的差异(F同),Fo 05(6,14)=2.85, Fo ol(6,14)一4.46 Letters a--e repressent significant difference at 1%(following is same) 的损失高达40%~60%,大青叶有效成分的损失高 达30%~60%。 方差分析与多重比较结果显示,对于板蓝根来 说,50、60、80℃烘干和晒干处理的有效成分量没有 显著差异;100~120℃烘干处理与其他各处理的有 效成分的量有显著差异。对于大青叶来说,50、60、80 ℃烘干,阴干和晒干处理的靛蓝的量无显著差异,靛 玉红的量有差异,高温干燥与其他处理均有显著差 异。因此,仅从其中的有效成分的量保存率方面考虑, 板蓝根、大青叶均不宜采用高温干燥(高于90℃)。 3.1.2 大青叶样品粉末0.5 g,置索氏提取器中,加入氯仿 100 mL浸泡15 h,分别在不同温度的水浴中连续加 干燥方法对板蓝根、大青叶外在质量的影 热回流提取(设定温度:75、80、85、90、95℃),浓缩 提取液,用氯仿定容到50 mL,0.45弘m微孔滤膜滤 过,高效液相色谱仪测定样品在不同提取温度下靛 蓝、靛玉红的量。 2.4数据处理:采用DPS数据分析软件,随机区组 设计,单因素实验统计分析。各处理间的差异采用 Duncan’S新复极差法进行比较,并按F一0.05和 F一0.01进行显著性检验[1 3 0|。 响:通过试验观察,晒干、阴干的大青叶呈灰绿色,略 带异味,50、60、80℃烘干的大青叶呈墨绿色,无异 味;100、120。C烘干的大青叶呈墨绿色,略带焦胡 味;各处理的板蓝根无明显差异,均呈淡黄色或黄白 色,但晒干、阴干的板蓝根有轻微异味。 3.2 提取温度对板蓝根、大青叶有效成分提取率的 影响:表2显示,提取时水浴温度对板蓝根、大青叶 的影响表现为温度较高或较低时提取率均低。水浴 温度在80"-85 oC时,靛蓝、靛玉红的提取率最高(板 蓝根中靛蓝为6.2~6.3 mg/kg,靛玉红为12.3~ 12.6 结果 3.1干燥方法对板蓝根、大青叶质量的影响 3.1.1 干燥方法对板蓝根、大青叶内在有效成分量 mg/kg;大青叶中靛蓝为331 mg/kg,靛玉红为 7 的影响:表1显示,60℃烘干的板蓝根(靛蓝平均量 6.168 9 361~363 mg/kg),其次是90、75、95℃的提取率最 mg/kg、靛玉红平均量12.548 3 8 mg/kg)和 低。方差分析与Duncan s多重比较结果表明,80和 85℃下提取率无显著差异,其余各温度下提取率均 有显著差异。水浴温度为80~85℃时,对板蓝根、大 青叶中有效成分的提取效果最佳。 4结论与讨论 4.1 大青叶(靛蓝平均量330.633 量362.325 8 mg/kg、靛玉红平均 mg/kg)中有效成分量最高,其次为50 ℃和80℃处理,经高温(100、120℃)干燥的板蓝 根、大青叶有效成分量远比60℃烘干的低。以60℃ 烘干为标准(100%),高温干燥可使板蓝根有效成分 结合药材性状、有效成分量等方面考虑,60~ 万方数据 ?114? 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs第39卷第1期2008年1月 表2不同提取温度对板蓝根、大青叶有效成分 提取率的影响 Table 2 Effects rate 索氏提取法的原理是烧瓶中的溶剂在热作用下 不断汽化,经过冷凝器冷凝到样品中对样品进行提 of different temperatures on extracting 取,携带了有效成分的溶剂再回到烧瓶中,如此循 环。这种过程是对样品的冷浸或温浸提取。对索氏 提取来说,水浴温度对有效成分提取率的影响,实际 上是通过影响溶剂汽化的速度从而影响提取次数的 结果。就溶剂对原料中有效成分进行提取的过程来 of bioactive components in Radix Isatidis and Folium Isntidis 75℃4.862 1 80℃ 85℃ 90℃ 95℃ 6.235 6 6.311 2 5.563 5 5.172 4 d a 7.909 5 12.615 5 e a 295.623 331.966 4 d 6 a 333.739 2 363.325 8 361.776 323.987 9 3 b a 讲,是在恒温条件下进行的,但回到烧瓶中的提取液 在溶剂被再次蒸发的过程中,在烧瓶中携带有效成 分不断受热,热不稳定成分就会分解,随着提取温度 的提高,分解也越多。以氯仿为溶剂提取板蓝根、大 青叶有效成分时,由于氯仿的沸点为61.2℃,当水 浴温度达到70℃以上时,就可对原料样品进行循环 提取。在提取时间一定的条件下(10 h),当水浴温度 低于80℃时,氯仿循环次数少,对原料提取次数也 就少,有效成分未被完全提取,因而提取率较低;当 水浴温度在80~85℃时,回流次数有所增加,使有 效成分提取更完全,提取率达到最高;水浴温度在 90~95℃时,提取率又有所降低。因此,在采用索氏 提取法提取板蓝根、大青叶有效成分时,必须选择合 适的水浴温度以保证较高的提取率。 参考文献: EI-I房德敏.中药指纹图谱技术的研究与应用EJ].中草药, 2005,36(4):632—634. a 12.324 4 b 10.321 5 C 331.652 7 320.508 1 302.231 1 a a C b C b C 9.348 4 d 301.392 6 d =!=竺堕!三!!!:!!!::!三!!!!:!!!::!三!!!!:!!!::兰三!!!:翌!:: Fo.05(4,10)=3.48,Fo.ol(4,10)一5.99 80℃烘干和晒干是板蓝根、大青叶较为理想的干燥 方式,在有条件的情况下尽量采用低温烘干的方式 干燥。100℃以上高温干燥和阴干的方法不可取。在 实际生产中,如天气晴朗可进行晒干,如遇多雨天 气,可采用干燥窑低温烘干。 中药材产地初加工是关系到中药材质量好坏的 关键,加工的目的是提高药效,利于包装、贮藏和运 输,加工不当不但会引起药材变色、变质、霉烂,而且 影响疗效。研究表明,新鲜的植物材料中含有使有效 成分(次生代谢物)分解的胞内酶(intracellular enzymes),未经干燥或未经杀青(杀酶)的材料放置 时间越长,由于胞内酶的分解作用,使其次生代谢物 的量降低也越多。如杜仲中含有可使环烯醚萜类分 解的胞内酶[1¨,所有经过杀青处理的杜仲叶中京尼 平苷酸(环烯醚萜类)的量比对照(阴干)高1倍左 右,其他处理均有效地防止了京尼平苷酸的分 解E123。不同干燥方法对板蓝根、大青叶有效成分的 量影响结果表明:采用60~80 oC烘干,板蓝根、大青 叶的有效成分损失少。采用阴干和高温烘干,板蓝 根、大青叶中有效成分量损失较多。阴干需要较长时 间,板蓝根、大青叶细胞中胞内酶分解了部分有效成 分,导致量降低。烘干处理均能起到杀青作用,有效 地防止了胞内酶对有效成分的分解。高温处理虽能 有效地防止胞内酶的分解,但板蓝根、大青叶中的有 效成分仍然有所降低,可能是因为高温处理导致部 分有效成分分解,如高温高压煎煮小檗碱的量只有 常压煎煮的65.7%[1 3|。 E23曹君,王少军,龚千锋,等.不同产地枳壳饮片炮制前后挥 发油成分的GC—MS分析EJ].中草药,2005,36i2):172— 177. 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[13]张晓燕,姚国新,吴金虎,等.两种方法制备黄连解毒汤中 小檗碱含量的比较[J].中国医院药学杂志,2003,23(8): 504—505. 万方数据 干燥方法和提取温度对板蓝根、大青叶有效成分的影响 作者: 作者单位: 董娟娥, 龚明贵, 梁宗锁, 王淑英, DONG Juan-e, GONG Ming-gui, LIANG Zong-suo , WANG Shu-ying 董娟娥,梁宗锁,DONG Juan-e,LIANG Zong-suo(西北农林科技大学,陕西,杨凌,712100;中国 科学院水利部水土保持研究所,陕西,杨凌,712100), 龚明贵,GONG Ming-gui(中国科学院水 利部水土保持研究所,陕西,杨凌,712100), 王淑英,WANG Shu-ying(宁夏平罗县黄渠桥镇林 业站,宁夏,平罗,753406) 中草药 CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS 2008,39(1) 8次 刊名: 英文刊名: 年,卷(期): 被引用次数: 参考文献(13条) 1.房德敏 中药指纹图谱技术的研究与应用[期刊论文]-中草药 2005(4) 2.曹君,王少军,龚千锋,杨世林,段启,张小娟 不同产地枳壳饮片炮制前后挥发油成分的GC-MS分析[期刊论文]-中草 药 2005(2) 3.邹节明,王力生 中药炮制的现状浅析[期刊论文]-中草药 2005(4) 4.董娟娥,梁宗锁 植物次生代谢物积累量影响因素分析[期刊论文]-西北植物学报 2004(10) 5.董娟娥,梁宗锁,尉芹,陈胜龙 不同区域松蓝根、叶(板蓝根、大青叶)有效成分含量差异[期刊论文]-应用生态 学报 2006(9) 6.汪雁玲 产地加工与中药饮片质量[期刊论文]-时珍国医国药 2003(9) 7.中华人民共和国药典 2005 8.叶爱莲;郑海岚;李水福 板蓝根冲剂的质量及其标准亟待重视 1995(09) 9.董娟娥,龚明贵,梁宗锁 板蓝根、大青叶中靛蓝和靛玉红的测定方法比较[期刊论文]-西北农林科技大学学报(自 然科学版) 2007(2) 10.徐文科 概率论与数理统计 2003 11.TakahashiT;Matsumoton N;Oshioh H The stability of bioactivc components in the bark of Eucommia ulmoides:Eucommia Cortex 1988(02) 12.MA X H;WEI Q Effects of different treatments on the bioactive constituents in Eucommia ulmoides 1999 13.张晓燕,姚国新,吴金虎,刘英 两种方法制备黄连解毒汤中小檗碱含量的比较[期刊论文]-中国医院药学杂志 2003(8) 本文读者也读过(9条) 1. 付世景.宗良纲.张丽娜.孙静克.FU Shi-jing.ZONG Liang-gang.ZHANG Li-na.SUN Jing-ke 镉、铅对板蓝根种 子发芽及抗氧化系统的影响[期刊论文]-种子2007,26(3) 2. 刘依.韩鲁佳.阎巧娟.刘向阳 板蓝根中靛蓝和靛玉红的提取及其质量分数的测定[期刊论文]-中国农业大学学报 2003,8(6) 3. 谢光杰 板蓝根的提取纯化工艺的研究[期刊论文]-黑龙江科技信息2009(16) 4. 董娟娥.龚明贵.梁宗锁.DONG Juan-e.GONG Ming-gui.LIANG Zong-suo 板蓝根、大青叶中靛蓝和靛玉红的测定 方法比较[期刊论文]-西北农林科技大学学报(自然科学版)2007,35(2) 5. 董娟娥.梁宗锁.尉芹.陈胜龙.DONG Juane.LIANG Zongsuo.WEI Qin.CHEN Shenglong 不同区域松蓝根、叶(板 蓝根、大青叶)有效成分含量差异[期刊论文]-应用生态学报2006,17(9) 6. 王艳 青黛的化学成分及其结构特征的研究[学位论文]2004 7. 谢晓亮.温春秀.吴志明.田伟.刘铭.刘玉军.XIE Xiao-liang.WEN Chun-xiu.WU Zhi-ming.TIAN Wei.LIU Ming. 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